nature.com'u ziyaret ettiğiniz için teşekkür ederiz. Kullandığınız tarayıcı sürümünün CSS desteği sınırlıdır. En iyi deneyim için, en son tarayıcı sürümünü kullanmanızı (veya Internet Explorer'da uyumluluk modunu kapatmanızı) öneririz. Ayrıca, sürekli desteği sağlamak için bu sitede stil veya JavaScript yer almayacaktır.
Melamin, bazı gıda kategorilerinde hem kazara hem de kasıtlı olarak bulunabilen, bilinen bir gıda kirleticidir. Bu çalışmanın amacı, bebek maması ve süt tozunda melaminin saptanmasını ve miktarının belirlenmesini doğrulamaktır. İran'ın farklı bölgelerinden temin edilen, bebek maması ve süt tozu da dahil olmak üzere toplam 40 ticari gıda örneği analiz edildi. Örneklerin yaklaşık melamin içeriği, yüksek performanslı sıvı kromatografisi-ultraviyole (HPLC-UV) sistemi kullanılarak belirlendi. 0,1–1,2 μg mL−1 aralığında melaminin saptanması için bir kalibrasyon eğrisi (R2 = 0,9925) oluşturuldu. Miktar ve saptama limitleri sırasıyla 1 μg mL−1 ve 3 μg mL−1 idi. Bebek maması ve süt tozunda melamin testi yapılmış ve sonuçlar, bebek maması ve süt tozu örneklerindeki melamin seviyelerinin sırasıyla 0,001–0,095 mg kg−1 ve 0,001–0,004 mg kg−1 olduğunu göstermiştir. Bu değerler, AB mevzuatı ve Codex Alimentarius ile uyumludur. Melamin içeriği azaltılmış bu süt ürünlerinin tüketiminin tüketici sağlığı için önemli bir risk oluşturmadığını belirtmek önemlidir. Bu durum, risk değerlendirmesi sonuçlarıyla da desteklenmektedir.
Melamin, siyanamidden türetilen, moleküler formülü C3H6N6 olan organik bir bileşiktir. Suda çözünürlüğü çok düşüktür ve yaklaşık %66 oranında azot içerir. Melamin, plastik, gübre ve gıda işleme ekipmanlarının (gıda ambalajı ve mutfak eşyaları dahil) üretiminde geniş bir yelpazede yasal kullanım alanına sahip, yaygın olarak kullanılan bir endüstriyel bileşiktir.1,2 Melamin ayrıca hastalıkların tedavisinde ilaç taşıyıcı olarak da kullanılır. Melamindeki yüksek azot oranı, bileşiğin yanlış kullanımına ve gıda bileşenlerine protein moleküllerinin özelliklerini kazandırmasına yol açabilir.3,4 Bu nedenle, süt ürünleri de dahil olmak üzere gıda ürünlerine melamin eklenmesi, azot içeriğini artırır. Bu nedenle, sütün protein içeriğinin gerçekte olduğundan daha yüksek olduğu yanlış bir şekilde sonucuna varılmıştır.
Eklenen her gram melamin için gıdanın protein içeriği %0,4 oranında artar. Ancak melamin suda yüksek oranda çözünür ve daha ciddi zararlara neden olabilir. Süt gibi sıvı ürünlere 1,3 gram melamin eklenmesi, sütün protein içeriğini %30 oranında artırabilir5,6. Melamin, protein içeriğini artırmak için hayvansal ve hatta insan gıdalarına eklenmesine rağmen7, Codex Alimentarius Komisyonu (CAC) ve ulusal yetkililer melamini gıda katkı maddesi olarak onaylamamış ve yutulması, solunması veya deri yoluyla emilmesi halinde tehlikeli olarak listelemiştir. 2012 yılında Dünya Sağlık Örgütü'nün (DSÖ) Uluslararası Kanser Araştırma Ajansı, insan sağlığına zararlı olabileceği gerekçesiyle melamini 2B sınıfı kanserojen olarak listelemiştir8. Melamine uzun süreli maruz kalma kansere veya böbrek hasarına neden olabilir2. Gıdalardaki melamin, siyanürik asit ile kompleks oluşturarak suda çözünmeyen sarı kristaller meydana getirebilir ve bu kristaller böbrek ve mesane dokusuna zarar verebileceği gibi idrar yolu kanserine ve kilo kaybına da neden olabilir.9,10 Akut gıda zehirlenmesine ve özellikle bebeklerde ve küçük çocuklarda yüksek konsantrasyonlarda ölüme yol açabilir.11 Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ), CAC kılavuzlarına dayanarak insanlar için tolere edilebilir günlük melamin alımını (TDI) günde 0,2 mg/kg vücut ağırlığı olarak belirlemiştir.12 ABD Gıda ve İlaç İdaresi (ABD FDA), bebek mamalarında melamin için maksimum kalıntı seviyesini 1 mg/kg ve diğer gıdalarda 2,5 mg/kg olarak belirlemiştir.2,7 Eylül 2008'de, bazı yerli bebek maması üreticilerinin ürünlerinin protein içeriğini artırmak için süt tozuna melamin eklediği ve bunun sonucunda süt tozu zehirlenmesi yaşandığı, ülke çapında 294.000'den fazla çocuğun hastalandığı ve 50.000'den fazla çocuğun hastaneye kaldırıldığı bir melamin zehirlenmesi olayının tetiklendiği bildirilmiştir.13
Kent hayatının zorlukları, anne veya çocuğun hastalığı gibi çeşitli faktörler nedeniyle emzirme her zaman mümkün olmayabiliyor ve bu da bebeklerin beslenmesinde mama kullanımına yol açıyor. Sonuç olarak, bileşim olarak anne sütüne mümkün olduğunca yakın mama üreten fabrikalar kuruldu.14 Piyasada satılan mamalar genellikle inek sütünden yapılır ve genellikle yağlar, proteinler, karbonhidratlar, vitaminler, mineraller ve diğer bileşiklerin özel bir karışımıyla hazırlanır. Anne sütüne yakın olması için mamaların protein ve yağ içeriği değişir ve süt türüne bağlı olarak vitaminler ve demir gibi mineraller gibi bileşiklerle zenginleştirilir.15 Bebekler hassas bir grup olduğundan ve zehirlenme riski bulunduğundan, mama tüketiminin güvenliği sağlık açısından hayati önem taşımaktadır. Çinli bebekler arasında melamin zehirlenmesi vakasından sonra, dünyanın dört bir yanındaki ülkeler bu konuya büyük önem vermiş ve bu alandaki hassasiyet de artmıştır. Bu nedenle, bebeklerin sağlığını korumak için mama üretiminin kontrolünü güçlendirmek özellikle önemlidir. Gıdalarda melamin tespiti için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), elektroforez, duyusal yöntem, spektrofotometri ve antijen-antikor enzim bağlantılı immünosorbent testi (ELISA) dahil olmak üzere çeşitli yöntemler mevcuttur.16 2007 yılında ABD Gıda ve İlaç İdaresi (FDA), gıdalardaki melamin ve siyanürik asidin belirlenmesi için bir HPLC yöntemi geliştirmiş ve yayınlamıştır; bu yöntem, melamin içeriğinin belirlenmesinde en etkili yöntemdir.17
Yeni bir kızılötesi spektroskopi tekniği kullanılarak ölçülen bebek mamalarındaki melamin konsantrasyonları, kilogram başına 0,33 ila 0,96 miligram (mg kg-1) arasında değişmektedir. 18 Sri Lanka'da yapılan bir çalışmada, tam yağlı süt tozundaki melamin seviyelerinin 0,39 ila 0,84 mg kg-1 arasında olduğu bulunmuştur. Ayrıca, ithal bebek maması örneklerinde sırasıyla 0,96 ve 0,94 mg/kg ile en yüksek melamin seviyeleri tespit edilmiştir. Bu seviyeler yasal sınırın (1 mg/kg) altında olsa da, tüketici güvenliği için bir izleme programına ihtiyaç duyulmaktadır. 19
İran bebek mamalarındaki melamin seviyelerini inceleyen çeşitli çalışmalar yapılmıştır. Örneklerin yaklaşık %65'inde melamin bulunmuş olup, ortalama 0,73 mg/kg ve maksimum 3,63 mg/kg'dır. Başka bir çalışmada ise bebek mamalarındaki melamin seviyesinin 0,35 ile 3,40 μg/kg arasında değiştiği ve ortalama 1,38 μg/kg olduğu bildirilmiştir. Genel olarak, İran bebek mamalarındaki melaminin varlığı ve seviyesi çeşitli çalışmalarda değerlendirilmiş olup, bazı örneklerde düzenleyici otoriteler tarafından belirlenen maksimum limiti (2,5 mg/kg/mama) aşan melamin bulunmuştur.
Gıda endüstrisinde süt tozunun doğrudan ve dolaylı olarak büyük miktarda tüketilmesi ve bebek mamalarının çocuk beslenmesindeki özel önemi göz önüne alındığında, bu çalışma süt tozu ve bebek mamalarında melamin tespit yöntemini doğrulamayı amaçlamıştır. Aslında, bu çalışmanın ilk amacı, yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ve ultraviyole (UV) dedektörü kullanarak bebek maması ve süt tozunda melamin katkısını tespit etmek için hızlı, basit ve doğru bir kantitatif yöntem geliştirmekti; ikinci olarak, bu çalışmanın amacı İran pazarında satılan bebek maması ve süt tozundaki melamin içeriğini belirlemekti.
Melamin analizi için kullanılan aletler, gıda üretim yerine bağlı olarak değişiklik göstermektedir. Süt ve bebek mamalarındaki melamin kalıntılarını ölçmek için hassas ve güvenilir bir HPLC-UV analiz yöntemi kullanılmıştır. Süt ürünleri, melamin ölçümünü etkileyebilecek çeşitli proteinler ve yağlar içermektedir. Bu nedenle, Sun vd. 22'nin belirttiği gibi, enstrümantal analizden önce uygun ve etkili bir temizleme stratejisi gereklidir. Bu çalışmada, tek kullanımlık şırınga filtreleri kullanılmıştır. Bu çalışmada, bebek maması ve süt tozundaki melamini ayırmak için bir C18 kolonu kullanılmıştır. Şekil 1, melamin tespiti için kromatogramı göstermektedir. Ayrıca, 0,1–1,2 mg/kg melamin içeren numunelerin geri kazanımı %95 ile %109 arasında değişmiş, regresyon denklemi y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925) olmuş ve bağıl standart sapma (RSD) değerleri %0,8 ile %2 arasında değişmiştir. Mevcut veriler, yöntemin incelenen konsantrasyon aralığında güvenilir olduğunu göstermektedir (Tablo 1). Melaminin aletsel tespit limiti (LOD) ve nicelleştirme limiti (LOQ) sırasıyla 1 μg mL−1 ve 3 μg mL−1'dir. Ayrıca, melaminin UV spektrumu 242 nm'de bir absorbsiyon bandı göstermiştir. Tespit yöntemi hassas, güvenilir ve doğrudur. Bu yöntem, melamin seviyesinin rutin olarak belirlenmesi için kullanılabilir.
Benzer sonuçlar çeşitli yazarlar tarafından da yayınlanmıştır. Süt ürünlerindeki melaminin analizi için yüksek performanslı sıvı kromatografisi-fotodiyot dizisi (HPLC) yöntemi geliştirilmiştir. Kantitatif belirlemenin alt sınırları, 240 nm'de süt tozu için 340 μg kg−1 ve bebek maması için 280 μg kg−1 olarak belirlenmiştir. Filazzi ve ark. (2012), HPLC ile bebek mamasında melaminin tespit edilemediğini bildirmiştir. Bununla birlikte, süt tozu örneklerinin %8'inde 0,505–0,86 mg/kg seviyesinde melamin bulunmuştur. Tittlemiet ve ark.23 benzer bir çalışma yürütmüş ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi-kütle spektrometrisi/MS (HPLC-MS/MS) ile bebek mamasının (örnek numarası: 72) melamin içeriğini yaklaşık 0,0431–0,346 mg kg−1 olarak belirlemiştir. Venkatasamy ve ark. (2010) tarafından yürütülen bir çalışmada, bebek maması ve sütteki melaminin tahmini için yeşil kimya yaklaşımı (asetonitril olmadan) ve ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC) kullanılmıştır. Numune konsantrasyon aralığı 1,0 ila 80 g/mL arasındaydı ve yanıt doğrusaldı (r > 0,999). Yöntem, 5-40 g/mL konsantrasyon aralığında %97,2-101,2 arasında geri kazanım oranları gösterdi ve tekrarlanabilirlik %1,0'dan daha düşük bağıl standart sapmaydı. Ayrıca, gözlemlenen LOD ve LOQ sırasıyla 0,1 g mL−1 ve 0,2 g mL−124 idi. Lutter ve ark. (2011), HPLC-UV kullanarak inek sütü ve süt bazlı bebek mamalarındaki melamin kontaminasyonunu belirledi. Melamin konsantrasyonları < 0,2 ila 2,52 mg kg−1 arasında değişiyordu. HPLC-UV yönteminin doğrusal dinamik aralığı, inek sütü için 0,05 ila 2,5 mg kg−1, protein kütle oranı %15'ten az olan bebek maması için 0,13 ila 6,25 mg kg−1 ve protein kütle oranı %15 olan bebek maması için 0,25 ila 12,5 mg kg−1 idi. LOD (ve LOQ) sonuçları, inek sütü için 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1), %15'ten az protein içeren bebek maması için 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) ve %15 protein içeren bebek maması için 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) olup, LOD ve LOQ için sinyal-gürültü oranı sırasıyla 3 ve 1025'tir. Diebes vd. (2012) yılında yapılan bir çalışmada, HPLC/DMD yöntemi kullanılarak bebek maması ve süt tozu örneklerindeki melamin seviyeleri araştırılmıştır. Bebek mamasında en düşük ve en yüksek seviyeler sırasıyla 9,49 mg kg−1 ve 258 mg kg−1 olarak bulunmuştur. Tespit limiti (LOD) ise 0,05 mg kg−1 olarak belirlenmiştir.
Javaid ve ark. Fourier dönüşümlü kızılötesi spektroskopisi (FT-MIR) ile bebek mamalarındaki melamin kalıntılarının 0,002–2 mg kg−1 aralığında olduğunu bildirmiştir (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai ve ark.27 melaminin tahmini için bir HPLC-DDA (λ = 220 nm) yöntemi önermiş ve süt tozu için 0,08 μg mL−1'lik bir LOQ elde etmiştir ki bu, bu çalışmada elde edilen seviyeden daha düşüktür. Sun ve ark. katı faz ekstraksiyonu (SPE) ile sıvı sütte melaminin tespiti için bir RP-HPLC-DAD geliştirmiştir. Sırasıyla 18 ve 60 μg kg−1'lik bir LOD ve LOQ elde etmişlerdir ki bu, mevcut çalışmadan daha hassastır. Montesano ve ark. HPLC-DMD yönteminin, protein takviyelerindeki melamin içeriğinin değerlendirilmesinde 0,05–3 mg/kg'lık bir nicelleştirme sınırı ile etkinliğini doğruladı; bu yöntem, bu çalışmada kullanılan yöntemden daha az hassastı.29
Şüphesiz ki, analitik laboratuvarlar çeşitli örneklerdeki kirleticileri izleyerek çevreyi korumada önemli bir rol oynamaktadır. Bununla birlikte, analiz sırasında çok sayıda reaktif ve çözücü kullanılması tehlikeli kalıntıların oluşmasına neden olabilir. Bu nedenle, analitik işlemlerin operatörler ve çevre üzerindeki olumsuz etkilerini azaltmak veya ortadan kaldırmak için 2000 yılında yeşil analitik kimya (GAC) geliştirilmiştir.26 Melamin tespiti için kromatografi, elektroforez, kapiler elektroforez ve enzim bağlantılı immünosorbent testi (ELISA) gibi geleneksel melamin tespit yöntemleri kullanılmıştır. Bununla birlikte, çok sayıda tespit yöntemi arasında, elektrokimyasal sensörler mükemmel hassasiyetleri, seçicilikleri, hızlı analiz süreleri ve kullanıcı dostu özellikleri nedeniyle büyük ilgi görmüştür.30,31 Yeşil nanoteknoloji, tehlikeli atık oluşumunu ve enerji tüketimini azaltarak sürdürülebilir uygulamaların hayata geçirilmesini teşvik eden nanomalzemeleri sentezlemek için biyolojik yolları kullanır. Örneğin, çevre dostu malzemelerden üretilen nanokompozitler, melamin32,33,34 gibi maddeleri tespit etmek için biyosensörlerde kullanılabilir.
Çalışma, katı faz mikroekstraksiyonunun (SPME), geleneksel ekstraksiyon yöntemlerine kıyasla daha yüksek enerji verimliliği ve sürdürülebilirliği nedeniyle etkili bir şekilde kullanıldığını göstermektedir. SPME'nin çevre dostu olması ve enerji verimliliği, onu analitik kimyada geleneksel ekstraksiyon yöntemlerine mükemmel bir alternatif haline getiriyor ve numune hazırlama için daha sürdürülebilir ve verimli bir yöntem sağlıyor35.
2013 yılında Wu ve arkadaşları, melamin ve anti-melamin antikorları arasındaki eşleşmeyi kullanan, yüksek hassasiyetli ve seçici bir yüzey plazmon rezonansı (mini-SPR) biyosensörü geliştirdiler. Bu biyosensör, immünolojik bir test (melaminle konjuge edilmiş sığır serum albümini kullanılarak) ile birleştirildiğinde, kullanımı kolay ve düşük maliyetli bir teknoloji olup, tespit limiti yalnızca 0,02 μg mL-136'dır.
Nasiri ve Abbasian, ticari numunelerde melamin tespiti için grafen oksit-kitosan kompozitleri (GOCS) ile birlikte yüksek potansiyelli taşınabilir bir sensör kullandılar37. Bu yöntem, ultra yüksek seçicilik, doğruluk ve tepki gösterdi. GOCS sensörü, dikkat çekici bir hassasiyet (239,1 μM−1), 0,01 ila 200 μM arasında doğrusal bir aralık, 1,73 × 104'lük bir afinite sabiti ve 10 nM'ye kadar bir LOD sergiledi. Ayrıca, Chandrasekhar ve ark. tarafından 2024 yılında yapılan bir çalışma, çevre dostu ve uygun maliyetli bir yaklaşım benimsedi. Çinko oksit nanopartiküllerini (ZnO-NPs) çevre dostu bir yöntemle sentezlemek için indirgeyici ajan olarak papaya kabuğu özütü kullandılar. Daha sonra, bebek mamalarında melaminin belirlenmesi için benzersiz bir mikro-Raman spektroskopisi tekniği geliştirildi. Tarımsal atıklardan elde edilen ZnO-NP'ler, melaminin izlenmesi ve tespiti için değerli bir tanı aracı ve güvenilir, düşük maliyetli bir teknoloji olarak potansiyel göstermiştir38.
Alizadeh ve ark. (2024), süt tozundaki melamini belirlemek için oldukça hassas bir metal-organik çerçeve (MOF) floresans platformu kullandı. Sensörün 3σ/S kullanılarak belirlenen doğrusal aralığı ve alt tespit limiti sırasıyla 40 ila 396,45 nM (25 μg kg−1 ila 0,25 mg kg−1'e eşdeğer) ve 40 nM (25 μg kg−1'e eşdeğer) idi. Bu aralık, bebek mamalarında (1 mg kg−1) ve diğer gıda/yem örneklerinde (2,5 mg kg−1) melaminin belirlenmesi için belirlenen maksimum kalıntı seviyelerinin (MRL) oldukça altındadır. Floresan sensör (terbiyum (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF), süt tozundaki melaminin tespitinde HPLC39'dan daha yüksek doğruluk ve daha hassas ölçüm yeteneği göstermiştir. Yeşil kimyada kullanılan biyosensörler ve nanokompozitler, yalnızca algılama yeteneklerini geliştirmekle kalmaz, aynı zamanda sürdürülebilir kalkınma ilkeleri doğrultusunda çevresel tehlikeleri de en aza indirir.
Yeşil kimya prensipleri, melaminin belirlenmesine yönelik çeşitli yöntemlere uygulanmıştır. Bir yaklaşım, bebek maması ve sıcak su gibi örneklerden melaminin verimli bir şekilde ekstraksiyonu için sitrik asit ile çapraz bağlanmış doğal polar polimer β-siklodextrin kullanan yeşil bir dağılımlı katı faz mikroekstraksiyon yönteminin geliştirilmesidir. Başka bir yöntem ise süt örneklerinde melaminin belirlenmesi için Mannich reaksiyonunu kullanır. Bu yöntem ucuz, çevre dostu ve 0,1–2,5 ppm'lik doğrusal aralık ve düşük tespit limiti ile oldukça doğrudur. Ayrıca, sıvı süt ve bebek mamasında melaminin kantitatif belirlenmesi için Fourier dönüşümlü kızılötesi iletim spektroskopisi kullanılarak yüksek doğruluk ve sırasıyla 1 ppm ve 3,5 ppm'lik tespit limitleri ile uygun maliyetli ve çevre dostu bir yöntem geliştirilmiştir. Bu yöntemler, yeşil kimya prensiplerinin melaminin belirlenmesi için verimli ve sürdürülebilir yöntemlerin geliştirilmesine uygulanmasını göstermektedir.
Çeşitli çalışmalar, katı faz ekstraksiyonu ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC)43 gibi yenilikçi melamin tespit yöntemlerinin yanı sıra, karmaşık ön işlem veya iyon çifti reaktifleri gerektirmeyen ve böylece kimyasal atık miktarını azaltan hızlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC)44 gibi yöntemler önermiştir. Bu yöntemler, süt ürünlerinde melamin tayini için doğru sonuçlar sağlamakla kalmaz, aynı zamanda yeşil kimya ilkelerine de uyar, tehlikeli kimyasalların kullanımını en aza indirir ve analitik sürecin genel çevresel etkisini azaltır.
Farklı markalara ait kırk numune üçer kez test edildi ve sonuçlar Tablo 2'de sunulmuştur. Bebek maması ve süt tozu numunelerindeki melamin seviyeleri sırasıyla 0,001 ila 0,004 mg/kg ve 0,001 ila 0,095 mg/kg arasında değişmiştir. Bebek mamalarının üç yaş grubu arasında anlamlı bir değişiklik gözlenmemiştir. Ayrıca, süt tozunun %80'inde melamin tespit edilirken, bebek mamalarının %65'inde melamin kontaminasyonu saptanmıştır.
Endüstriyel süt tozundaki melamin içeriği, bebek mamasına göre daha yüksekti ve aradaki fark anlamlıydı (p<0,05) (Şekil 2).
Elde edilen sonuçlar FDA tarafından belirlenen limitlerin altında (1 ve 2,5 mg/kg'ın altında) çıktı. Ayrıca, sonuçlar CAC (2010) ve AB45,46 tarafından belirlenen limitlerle uyumludur; yani izin verilen maksimum limit bebek maması için 1 mg kg-1 ve süt ürünleri için 2,5 mg kg-1'dir.
Ghanati ve ark.47 tarafından 2023 yılında yapılan bir çalışmaya göre, İran'da farklı türdeki paketlenmiş sütlerdeki melamin içeriği 50,7 ile 790 μg kg−1 arasında değişmektedir. Sonuçları FDA'nın izin verilen sınırının altındadır. Bizim sonuçlarımız Shoder ve ark.48 ve Rima ve ark.49'un sonuçlarından daha düşüktür. Shoder ve ark. (2010), ELISA ile belirlenen süt tozundaki (n=49) melamin seviyelerinin 0,5 ile 5,5 mg/kg arasında değiştiğini bulmuştur. Rima ve ark., süt tozundaki melamin kalıntılarını floresans spektrofotometresi ile analiz etmiş ve süt tozundaki melamin içeriğinin 0,72–5,76 mg/kg olduğunu bulmuştur. 2011 yılında Kanada'da, sıvı kromatografisi (LC/MS) kullanılarak bebek mamalarındaki (n=94) melamin seviyelerini izlemek için bir çalışma yapılmıştır. Melamin konsantrasyonlarının kabul edilebilir sınırın altında olduğu tespit edildi (ön standart: 0,5 mg kg−1). Tespit edilen hileli melamin seviyelerinin protein içeriğini artırmak için kullanılan bir taktik olması olası değildir. Bununla birlikte, gübre kullanımı, konteyner içeriğinin yer değiştirmesi veya benzer faktörlerle açıklanamaz. Ayrıca, Kanada'ya ithal edilen süt tozundaki melaminin kaynağı açıklanmamıştır50.
Hassani ve ark. 2013 yılında İran pazarındaki süt tozu ve sıvı sütteki melamin içeriğini ölçtüler ve benzer sonuçlar buldular. Sonuçlar, bir marka süt tozu ve sıvı süt hariç, diğer tüm örneklerin melamin ile kontamine olduğunu ve süt tozunda 1,50 ila 30,32 μg g−1, sütte ise 0,11 ila 1,48 μg ml−1 arasında değişen seviyelerde olduğunu gösterdi. Özellikle, örneklerin hiçbirinde siyanürik asit tespit edilmedi, bu da tüketiciler için melamin zehirlenmesi olasılığını azaltmaktadır. 51 Önceki çalışmalar, süt tozu içeren çikolata ürünlerindeki melamin konsantrasyonunu değerlendirmiştir. İthal örneklerin yaklaşık %94'ü ve İran örneklerinin %77'si melamin içeriyordu. İthal örneklerdeki melamin seviyeleri 0,032 ila 2,692 mg/kg arasında değişirken, İran örneklerindeki seviyeler 0,013 ila 2,600 mg/kg arasında değişiyordu. Genel olarak, örneklerin %85'inde melamin tespit edildi, ancak yalnızca belirli bir markada izin verilen sınırın üzerinde seviyeler bulundu.44 Tittlemier ve ark. süt tozunda melamin seviyelerinin 0,00528 ile 0,0122 mg/kg arasında değiştiğini bildirmiştir.
Tablo 3, üç yaş grubu için risk değerlendirme sonuçlarını özetlemektedir. Tüm yaş gruplarında risk 1'den azdır. Bu nedenle, bebek mamalarındaki melaminden kaynaklanan kanserojen olmayan bir sağlık riski bulunmamaktadır.
Süt ürünlerindeki düşük kontaminasyon seviyeleri, hazırlık sırasında istem dışı kontaminasyondan kaynaklanabilirken, yüksek seviyeler kasıtlı eklemelerden kaynaklanabilir. Ayrıca, düşük melamin seviyelerine sahip süt ürünlerinin tüketiminden kaynaklanan insan sağlığı riski genel olarak düşük kabul edilmektedir. Bu nedenle, bu kadar düşük melamin seviyeleri içeren ürünlerin tüketiminin tüketici sağlığı için herhangi bir risk oluşturmadığı sonucuna varılabilir.52
Süt ürünleri sektöründe gıda güvenliği yönetiminin, özellikle halk sağlığının korunması açısından önemi göz önüne alındığında, süt tozu ve bebek mamalarındaki melamin seviyelerini ve kalıntılarını değerlendirmek ve karşılaştırmak için bir yöntem geliştirilmesi ve doğrulanması son derece önemlidir. Bebek maması ve süt tozundaki melaminin belirlenmesi için basit ve doğru bir HPLC-UV spektrofotometrik yöntem geliştirilmiştir. Yöntemin güvenilirliği ve doğruluğu sağlanmıştır. Yöntemin tespit ve kantifikasyon limitlerinin, bebek maması ve süt tozundaki melamin seviyelerini ölçmek için yeterince hassas olduğu gösterilmiştir. Verilerimize göre, İran örneklerinin çoğunda melamin tespit edilmiştir. Tespit edilen tüm melamin seviyeleri, CAC tarafından belirlenen maksimum izin verilen limitlerin altında olup, bu tür süt ürünlerinin tüketiminin insan sağlığı için risk oluşturmadığını göstermektedir.
Kullanılan tüm kimyasal reaktifler analitik saflıktaydı: %99 saflıkta melamin (2,4,6-triamino-1,3,5-triazin) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); HPLC sınıfı asetonitril (Merck, Darmstadt, Almanya); ultra saf su (Millipore, Morfheim, Fransa). Tek kullanımlık şırınga filtreleri (Chromafil Xtra PVDF-45/25, gözenek boyutu 0,45 μm, membran çapı 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Almanya).
Numunelerin hazırlanmasında ultrasonik banyo (Elma, Almanya), santrifüj (Beckman Coulter, Krefeld, Almanya) ve HPLC (KNAUER, Almanya) kullanıldı.
UV dedektörlü yüksek performanslı sıvı kromatografisi (KNAUER, Almanya) kullanıldı. HPLC analiz koşulları şu şekildeydi: ODS-3 C18 analitik kolon (4,6 mm × 250 mm, partikül boyutu 5 μm) (MZ, Almanya) ile donatılmış bir UHPLC Ultimate sistemi kullanıldı. HPLC elüenti (hareketli faz), 1 mL min-1 akış hızında bir TFA/metanol karışımı (450:50 mL) idi. Algılama dalga boyu 242 nm idi. Enjeksiyon hacmi 100 μL, kolon sıcaklığı 20 °C idi. İlacın tutunma süresi uzun olduğundan (15 dakika), bir sonraki enjeksiyon 25 dakika sonra yapılmalıdır. Melamin, melamin standartlarının tutunma süresi ve UV spektrum pikinin karşılaştırılmasıyla tanımlandı.
Su kullanılarak 10 μg/mL'lik standart bir melamin çözeltisi hazırlandı ve ışıktan uzak bir yerde buzdolabında (4 °C) saklandı. Stok çözelti, hareketli faz ile seyreltilerek çalışma standart çözeltileri hazırlandı. Her bir standart çözelti, HPLC'ye 7 kez enjekte edildi. Kalibrasyon denklemi 10, belirlenen pik alanı ve belirlenen konsantrasyonun regresyon analizi ile hesaplandı.
İran'daki yerel süpermarketlerden ve eczanelerden, farklı yaş gruplarındaki (0-6 ay, 6-12 ay ve >12 ay) bebeklerin beslenmesi için ticari olarak temin edilebilen inek sütü tozu (20 numune) ve farklı marka inek sütü bazlı bebek maması numuneleri (20 numune) satın alındı ​​ve analiz edilene kadar buzdolabında (4 °C) saklandı. Daha sonra, 1 ± 0,01 g homojenize süt tozu tartıldı ve asetonitril:su (50:50, v/v; 5 mL) ile karıştırıldı. Karışım 1 dakika karıştırıldı, ardından ultrasonik banyoda 30 dakika sonikasyona tabi tutuldu ve son olarak 1 dakika çalkalandı. Karışım daha sonra oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 9000 × g'de santrifüjlendi ve süpernatant, 0,45 μm'lik bir şırınga filtresi kullanılarak 2 ml'lik bir otomatik numune alma şişesine süzüldü. Süzüntü (250 μl) daha sonra su (750 μl) ile karıştırıldı ve HPLC sistemine enjekte edildi10,42.
Yöntemi doğrulamak için, optimum koşullar altında geri kazanım, doğruluk, tespit limiti (LOD), nicelleştirme limiti (LOQ) ve hassasiyeti belirledik. LOD, tepe yüksekliği temel gürültü seviyesinin üç katı olan örnek içeriği olarak tanımlandı. Öte yandan, tepe yüksekliği sinyal-gürültü oranının 10 katı olan örnek içeriği LOQ olarak tanımlandı.
Cihazın tepkisi, yedi veri noktasından oluşan bir kalibrasyon eğrisi kullanılarak belirlendi. Farklı melamin içerikleri kullanıldı (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 ve 1,2). Melamin hesaplama prosedürünün doğrusallığı belirlendi. Ayrıca, boş numunelere çeşitli farklı melamin seviyeleri eklendi. Kalibrasyon eğrisi, bebek maması ve toz süt numunelerine sürekli olarak 0,1–1,2 μg mL−1 standart melamin çözeltisi enjekte edilerek oluşturuldu ve R2 = 0,9925 olarak bulundu. Doğruluk, prosedürün tekrarlanabilirliği ve yeniden üretilebilirliği ile değerlendirildi ve numunelerin ilk ve sonraki üç günde (üçer kez) enjekte edilmesiyle elde edildi. Yöntemin tekrarlanabilirliği, eklenen melaminin üç farklı konsantrasyonu için RSD % hesaplanarak değerlendirildi. Hassasiyeti belirlemek için geri kazanım çalışmaları yapıldı. Ekstraksiyon yöntemiyle elde edilen geri kazanım derecesi, bebek maması ve kuru süt örneklerinde üç farklı melamin konsantrasyonu seviyesinde (0,1, 1,2, 2) hesaplandı9,11,15.
Tahmini günlük alım (EDI) aşağıdaki formül kullanılarak belirlendi: EDI = Ci × Cc/BW.
Ci, ortalama melamin içeriğini, Cc süt tüketimini ve BW ise çocukların ortalama ağırlığını ifade eder.
Veri analizi SPSS 24 kullanılarak gerçekleştirildi. Normallik, Kolmogorov-Smirnov testi ile test edildi; tüm veriler parametrik olmayan testlerdi (p = 0). Bu nedenle, gruplar arasındaki anlamlı farklılıkları belirlemek için Kruskal-Wallis testi ve Mann-Whitney testi kullanıldı.
Ingelfinger, Jr. Melamin ve küresel gıda kontaminasyonuna etkisi. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA ve diğerleri. Çocuk kaplarında melaminin göçü üzerinde pH'ın etkisi. Uluslararası Gıda Kirliliği Dergisi, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP ve Gilbert, IH. Zehirli bileşiklerin tripanosomların iç kısmına yönlendirilmesi. Parazitolojide İlerleme 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, ve diğerleri. Melamin dendrimerlerinin ilaç taşıma araçları olarak in vitro ve in vivo değerlendirilmesi. Uluslararası Eczacılık Dergisi, 281(1–2), 129–132(2004).
Dünya Sağlık Örgütü. Melamin ve siyanürik asidin toksikolojik yönlerini gözden geçirmek üzere düzenlenen 1-4. Uzman Toplantıları (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH ve Lee, PK-T. Melamin toksisitesi ve böbrek. Amerikan Nefroloji Derneği Dergisi 20(2), 245–250 (2009).
Öztürk, S. ve Demir, N. Süt ürünlerinde melaminin yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile tanımlanması için yeni bir IMAC adsorbanının geliştirilmesi. Gıda Sentezi ve Analizi Dergisi 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. ve Imim, A. Mannich yeşil reaksiyonuna dayalı sıvı sütte melaminin basit spektrofotometrik tayini. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. ve El-Habib, R. Bebek maması, süt tozu ve pangasius örneklerinde melaminin HPLC/diyot dizi kromatografisi ile belirlenmesi. Çevre Analitik Toksikolojisi Dergisi, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD ve Osterloh, JD Melamin toksisitesi. Tıp Toksikolojisi Dergisi, 6, 50–55 (2010).
Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ), Melamin ve siyanürik asidin toksikolojisi ve sağlık yönleri: Sağlık Kanada'nın desteğiyle düzenlenen DSÖ/FAO işbirliği uzman toplantısının raporu, Ottawa, Kanada, 1-4 Aralık 2008 (2009).
Korma, SA, ve diğerleri. Yeni fonksiyonel yapısal lipitler içeren bebek maması tozu ile ticari bebek mamasının lipit bileşimi ve kalitesinin karşılaştırmalı çalışması. Avrupa Gıda Araştırma ve Teknolojisi 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. ve Hashem, H. Palm yağı kullanılarak bebek mamalarının besin değerinin, kalite özelliklerinin ve raf ömrünün iyileştirilmesi. Orta Doğu Tarım Araştırmaları Dergisi 6, 274–281 (2017).
Yin, W., ve diğerleri. Çiğ süt, kuru süt ve hayvan yeminde melaminin tespiti için melamin karşıtı monoklonal antikorların üretimi ve dolaylı rekabetçi ELISA yönteminin geliştirilmesi. Tarım ve Gıda Kimyası Dergisi 58(14), 8152–8157 (2010).